中药学论文_黄芪甲苷上调miR-199a-5p表达
文章目录
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 动物
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要仪器
1.2 方法
1.2.1 神经干细胞分离、原代培养与传代
1.2.2 神经干细胞鉴定
1.2.2. 1 神经干细胞标志物检测
1.2.2. 2 神经干细胞增殖特性检测
1.2.2. 3 神经干细胞分化能力检测
1.2.3 OGD/R模型的建立
1.2.4 细胞分组与干预措施
1.2.5 细胞活性检测
1.2.6 AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测神经干细胞凋亡
1.2.7 Real-time qPCR检测miR-199a-5p基因表达
1.2.8 免疫印迹法检测caspase-3、cleaved caspase-3蛋白表达
1.3 统计学分析
2 结果
2.1 神经干细胞的体外培养与鉴定
2.2 黄芪甲苷促进OGD/R损伤的神经干细胞存活
2.3 黄芪甲苷抑制OGD/R诱导的神经干细胞凋亡
2.4 黄芪甲苷通过上调miR-199a-5p促进OGD/R损伤的神经干细胞存活
2.5 黄芪甲苷通过上调miR-199a-5p抑制OGD/R诱导的神经干细胞凋亡
2.6 黄芪甲苷下调OGD/R损伤的神经干细胞cleaved caspase-3蛋白表达
3 讨论
文章摘要:[目的]探讨黄芪甲苷是否通过上调miR-199a-5p抑制氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）诱导的神经干细胞凋亡。[方法]分离14 d胎龄SD大鼠的大脑皮层神经干细胞并鉴定，随机分为正常对照组、模型对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+miR-199a-5p拮抗剂组（拮抗剂组）和黄芪甲苷+miR-199a-5p拮抗剂对照组（拮抗剂对照组）。除正常对照组外，其余组神经干细胞先行氧糖剥夺8 h，再灌注72 h，拮抗剂组和拮抗剂对照组分别采用脂质体2000转染miR-199a-5p拮抗剂和拮抗剂对照。采用2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑单钠盐[2-（2-methoxy-4-nitrophenyl）-3-（4-nitrophenyl）-5-（2,4-disulfonic acid benzene）-2H-tetrazole monosodium salt,CCK-8]法检测神经干细胞活性，异硫氰酸荧光素标记磷脂结合蛋白/碘化丙啶（Annexin-fluorescein isothiocyanate isomer/propidium iodide,AnnexinⅤ-FITC/PI）双染法检测神经干细胞凋亡，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR）检测miR-199a-5p表达，免疫印迹法检测切割型半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）蛋白表达。[结果]分离培养的神经干细胞纯度为98.41%，黄芪甲苷能够提高OGD/R损伤的神经干细胞存活率，其中50μmol·L-1黄芪甲苷效果最佳（P<0.01）；与模型对照组比较，50μmol·L-1黄芪甲苷能抑制OGD/R损伤的神经干细胞凋亡（P<0.01），上调miR-199a-5p表达（P<0.01），下调cleaved caspase-3蛋白表达（P<0.01），而miR-199a-5p拮抗剂能显著逆转上述效应（P<0.01）。[结论]黄芪甲苷能够促进OGD/R损伤的神经干细胞存活，抑制其凋亡，作用机制可能与其上调miR-199a-5p表达，抑制cleaved caspase-3蛋白表达有关。
文章关键词:
论文作者:李钰 丁文倩 李琳 许家栋 方燕 杨琰 胡小伟 储利胜
作者单位:浙江中医药大学基础医学院
论文DOI:10.16466/j.issn1005-5509.2022.05.001
论文分类号:R285
